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液相色譜柱在選擇時應(yīng)該注意什么參數(shù)變化

更新時間:2021-02-22      點(diǎn)擊次數(shù):1954
  液相色譜柱,是一種用于液體色譜分析儀器在選擇色譜柱之前,先多了解自己的樣品和雜質(zhì),他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等。以下內(nèi)容對色譜柱的參數(shù)進(jìn)行分析。
  1、色譜柱尺寸
  較長的色譜柱組分保留較強(qiáng),運(yùn)行時間較長,柱效更高,分離度效果更好。在實(shí)際工作中應(yīng)綜合衡量運(yùn)行時間和柱效,選擇長度適宜的色譜柱。例如含量測定、溶出檢測對于分離的要求較低,可選用較短的色譜柱,減少運(yùn)行時間;有關(guān)物質(zhì)一般選擇較長的色譜柱,提高分離效果。
  內(nèi)徑小的色譜柱靈敏度較高,峰型更窄,但是載樣量較小。如果載樣量滿足要求,需要更高更尖銳的峰提高靈敏度,可以選擇更小內(nèi)徑。但是如果進(jìn)樣量超過了柱載樣量,色譜峰將很大限度變寬。所以應(yīng)在靈敏度和載樣量之間綜合衡量。
  粒徑小的色譜柱分離度較好,色譜柱壓力更大。如果5μm粒徑的色譜柱分離度稍有不足,則同型號3μm色譜柱的分離度一般會提供令人滿意的選擇性。
  如果選擇較小尺寸的色譜柱,應(yīng)衡量柱外死體積對柱效的影響,柱外死體積包括連接管線、進(jìn)樣體積、色譜柱接頭與色譜柱連接處的空隙等。所以一般超高效液相使用的色譜柱不適用于常規(guī)液相儀。小規(guī)格色譜柱應(yīng)該使用同一品牌的儀器,減少連接處空隙引入的死體積。題外話:島津、安捷倫、waters之間儀器管線接頭和色譜柱不匹配,儀器和色譜柱品牌不一致必然引入較大連接空隙,應(yīng)注意這方面的影響。
  2、其他參數(shù)
  高比表面積具有較強(qiáng)的保留能力、柱容量和分離度,低比表面積能更快達(dá)到平衡狀態(tài),這點(diǎn)在梯度淋洗中很有意義。
  大孔徑的填料可以延長大分子在填料中的滯留時間,達(dá)到充分分離,改善峰型。大分子樣品一般應(yīng)選擇較大孔徑色譜柱,如蛋白質(zhì)、多肽類。
  單齒鍵合色譜柱平衡更快;雙齒鍵合穩(wěn)定性較好,柱容量較大。
  碳栽量大保留較強(qiáng),分離效果較好。反之保留較弱,分離效果較差。
  封尾(也稱封端)柱能減輕堿性組分(陽離子)與硅膠表面殘留硅氧負(fù)離子作用而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象;對于極性樣品經(jīng)封尾處理與未經(jīng)封尾處理的色譜柱選擇性也不同。一般堿性化合物應(yīng)選擇封尾處理的色譜柱。