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近年來,為減少分析時(shí)間和提高分析通量而誕生的超高效液相色譜技術(shù)取得了令人矚目的發(fā)展。超高效液相色譜儀器能夠承受更高系統(tǒng)壓力和流速,并且分析速度和效率大大提升;檢測器模塊的改進(jìn)和新的數(shù)據(jù)處理算法也有效提升信號(hào)采集的速率;現(xiàn)代色譜柱技術(shù)的發(fā)展,即使是很短的柱長也能提供足夠高效色譜分離效率,比如恒譜生液相色譜柱有30、50、75、100、150、200、250和300mm等多種長度。高效的分離技術(shù)歸功于液相硅膠色譜填料,通過恒譜生的先進(jìn)的技術(shù)處理,金屬含量極低的99.9%超高純度球型多孔硅膠在孔徑、孔體積、比表面積、碳含量、金屬離子含量、峰型對稱度等都有統(tǒng)一管理和質(zhì)量保障。
對液相色譜技術(shù)的研究有許多方向,其中提高通量是能夠提升液相色譜分析速率的重要研究方向。在標(biāo)準(zhǔn)儀器操作模式下,自動(dòng)進(jìn)樣器序列發(fā)生在每次進(jìn)樣之前。該順序通常包括將針頭移至樣品瓶位置、取樣、移回進(jìn)樣器閥以及一系列針頭清洗以減少樣品殘留。這種方法有很多限制和操作步驟,可能會(huì)增加儀器循環(huán)時(shí)間,從而降低整體分析通量。
這里介紹一下多次進(jìn)樣技術(shù),同步進(jìn)樣循環(huán)樣品制備的一個(gè)變化是單次實(shí)驗(yàn)運(yùn)行中的多次進(jìn)樣 (MISER) 技術(shù)。在 MISER 中,多次進(jìn)樣以與上述相同的方式運(yùn)行,但數(shù)據(jù)不是作為單獨(dú)的色譜圖收集的,而是收集在單個(gè)數(shù)據(jù)文件中。這是定性工作的理想策略,其中進(jìn)樣序列中的一系列運(yùn)行的快速比較可以快速識(shí)別樣品組中的一般趨勢和異常值(即高豐度和低豐度峰)。
MISER 的主要缺點(diǎn)是和每個(gè)*的運(yùn)行收集單獨(dú)的色譜圖相比,峰量化的難度增加。許多用于定量的軟件算法使用特定保留時(shí)間(和/或 m/z 值,取決于檢測模式)下分析物峰和內(nèi)標(biāo)峰之間的面積比較,當(dāng)多個(gè)單獨(dú)的分離全部完成時(shí),這可能更難合并繪制在單個(gè)色譜圖上。雖然它仍然可以通過液相色譜圖拆分程序或手動(dòng)處理來完成,但這些策略需要更多的用戶交互以確保所有峰都正確匹配。
隨著高通量篩選實(shí)驗(yàn)中運(yùn)行次數(shù)的增加,整體工作量顯著增加。因此,重要的是要考慮正在進(jìn)行的高通量實(shí)驗(yàn)的總體目的,更具體地說,它們是定性的還是定量的,以確定哪種方法適合減少循環(huán)時(shí)間。